奥林巴斯显微镜使用教程

开机与前期准备（安全第一）

1. 安放与检查：放平稳台面，距边缘≥2–3 cm；安装目镜与物镜（低倍先入光路），载物台、调焦、光源、聚光镜无松动；电源接稳压插座，检查线缆完好。

2. 开机与光源预热：打开主机电源；LED 即开即用，卤素灯预热 3–5 分钟；光强先调至中低档，避免强光伤眼与样品漂白。

3. 瞳距与屈光度校准：双目筒调至与瞳距一致；用低倍镜找到样品，右眼调右目镜屈光度环，左眼调左目镜，消除视力差，提升舒适度与清晰度。

4. 聚光镜与光阑初调：聚光镜升至与载物台齐平或略高；孔径光阑调至对应物镜 NA 的 70%–80%，视场光阑缩小至略小于视野，再居中并渐开至边缘清晰，以兼顾分辨率与对比度。

样品准备与放置

1. 样品要求：切片 / 涂片干燥、无气泡、封片良好；活细胞用培养皿 / 载玻片，确保平整居中。

2. 放置与固定：置于载物台中央，用压片夹固定；移动载物台使目标区域对准通光孔，避免观察中移位。

明场观察标准流程（低倍→高倍→油镜）

1. 低倍镜定位（10× 为主）：转物镜转盘将 10× 对准通光孔；侧面观察，粗调下降载物台（或上升物镜）至接近样品但不接触；目镜观察并反向粗调上升，出现模糊像后用微调至清晰；将目标移至视野中央。

2. 高倍镜精调（40× 为主）：低倍目标居中后，侧面观察切换 40×，避免镜头碰样品；仅用微调对焦；微调光强与孔径光阑，优化反差与清晰度；禁止用粗调，防止撞片与损伤镜头。

3. 油镜观察（100×，仅浸油型）：低倍 / 高倍定位后，移出物镜，在样品目标区滴一滴镜油；侧面观察将 100× 油镜缓慢移入油滴，确保浸润无气泡；仅用微调对焦；观察后立即用镜头纸蘸无水乙醇 / 二甲苯混合液（或专用清洁液）擦净油镜与样品表面，避免油渍残留。

荧光观察关键要点（BX53 等带荧光模块）

1. 先明场定位：用明场找到目标并居中，再切换荧光模式；关闭明场光源，打开荧光激发器，汞灯预热 15 分钟左右，LED 荧光可即开即用。

2. 滤光片与曝光：选择对应通道（DAPI/GFP/RFP 等）；从低光强、短曝光开始，逐步提升，避免样品漂白与探测器饱和；必要时使用抗淬灭剂。

3. 安全与维护：避免直视激发光；汞灯冷却后再开盖；定期清洁滤光片与光路，防止灰尘影响成像。

成像与记录

1. 目镜观察：记录视野位置、放大倍数、关键结构与测量数据。

2. 相机采集：切换光路至相机；启动采集软件（如 cellSens），设置曝光、增益、白平衡；对焦清晰后拍摄，命名归档，备份数据。

关机与清洁维护

1. 关机顺序：关闭荧光激发器→关闭主机电源→断开市电；卤素灯 / 汞灯冷却后再盖防尘罩。

2. 清洁：镜头用镜头纸轻擦，油污用专用清洁液；载物台、压片夹用无尘纸蘸酒精擦拭；聚光镜与光阑清洁后复位。

3. 收纳：物镜转至低倍，载物台降至低位，聚光镜复位；盖防尘罩，登记使用记录。